藥物的光安全性評價

Photosafety Evaluation of Pharmaceuticals    藥物的光安全性評價

1．前言

1.1．目的

本指導(dǎo)原則的目的是為支持藥物臨床試驗或上市的光安全性評估推薦標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)技術(shù)要求的協(xié)調(diào)統(tǒng)一。其內(nèi)容包括增加啟動光安全評價的因素以及與 ICH M3（R2）第14部分光安全性試驗結(jié)合考慮 （參考文獻(xiàn) 1）。本指導(dǎo)原則應(yīng)減少各區(qū)域之間對光安全性評價技術(shù)要求出現(xiàn)實質(zhì)性差異的可能性。

本指導(dǎo)原則分為幾個部分：第 2部分討論光安全性評價的考慮因素； 第3部分介紹目前的非臨床光安全性試驗方法，但不涉及具體的評價策略； 第4部分介紹臨床光安全性評估；第 5部分介紹如何利用第 2、3、4部分闡述的考慮因素和試驗方法，評估全身給藥或皮膚給藥途徑光安全性的策略。

根據(jù) 3R原則（減少/優(yōu)化/替代），盡量減少動物的使用，應(yīng)考慮采用非動物試驗的方法或以臨床試驗數(shù)據(jù)來評估光安全性。

1.2．背景

ICH M3 （R2） 為藥物研發(fā)相關(guān)的光安全性評估實施時間提供了指導(dǎo)性意見：建議進(jìn)行潛在光毒性的初步評價，必要時，應(yīng)在大樣本受試者應(yīng)用的臨床試驗（III期）開展前進(jìn)行試驗評估。ICH S9也介紹了腫瘤藥物光安全性試驗的實施時間。但 ICH M3（R2）和 ICH S9均未提供有關(guān)試驗方案的具體信息。ICH S10 包括了進(jìn)行光安全性試驗合理性和可能的評估方案內(nèi)容的具體細(xì)節(jié)。

1.3．范圍

本指導(dǎo)原則通常適用于新的藥物活性成分（APIs）、含新輔料的臨床皮膚用制劑（包括皮膚貼劑）和光動力治療產(chǎn)品。

因為體外試驗方法預(yù)測眼部光毒性的可靠性未知，而且沒有標(biāo)準(zhǔn)的體內(nèi)試驗方法評估經(jīng)眼給藥途徑的藥物光毒性（見注釋 1），所以沒有對經(jīng)眼給藥途徑的藥物提供具體指導(dǎo)意見。

光動力治療藥物是基于光化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生期望的藥理作用而開發(fā)，通常不需要增加光毒性評價，但需進(jìn)行毒代動力學(xué)及組織分布評估，以期對患者作合適的風(fēng)險管理。

本指導(dǎo)原則一般不適用于多肽、蛋白、抗體偶聯(lián)或寡聚核苷酸類藥物，也不適用于已上市產(chǎn)品成分，除非對 APIs 或輔料有新的安全性擔(dān)憂（如劑型由片劑改為外用膏劑）。

1.4．一般原則

藥物的光安全性評估是一個綜合的認(rèn)知，同時包括對光化學(xué)特征、非臨床研究數(shù)據(jù)以及人體安全信息的評估，目的在于確定是否需要風(fēng)險小化措施以預(yù)防人體不良事件的發(fā)生。

光安全性試驗評估應(yīng)結(jié)合光毒性、光過敏性、光遺傳毒性、光致癌性四種不同的反應(yīng)進(jìn)行。當(dāng)前的觀點認(rèn)為開展光遺傳毒性（注釋 2）和光致癌性試驗（ICH M3(R2)注釋 6）對人用藥物沒有意義，因此本指導(dǎo)原則側(cè)重于光毒性和光過敏性，相關(guān)的定義如下：

光毒性（光刺激性）：由光誘導(dǎo)的，組織對光反應(yīng)化合物的急性反應(yīng)。

光過敏性：藥物經(jīng)光化學(xué)反應(yīng)生成光產(chǎn)物（例如：蛋白加合物）導(dǎo)致的免疫反應(yīng)。

光敏化偶爾作為描述光誘導(dǎo)組織反應(yīng)的通用術(shù)語。但為了清晰地區(qū)分光過敏性和光毒性， 本指導(dǎo)原則不用光敏化。

如果一個化合物需要闡明其光毒性和/或光過敏性， 則應(yīng)具有以下關(guān)鍵特征：

吸收光為自然光線（波長范圍為 290-700nm）；

吸收紫外/可見光后產(chǎn)生活性物質(zhì)；

在光暴露組織（如皮膚、眼睛等）有充分的分布；

如果一個化合物不滿足以上條件中的一個或多個，通常不具有直接的光毒性擔(dān)憂，但經(jīng)由間接機(jī)制也可引起皮膚對光的敏感性增加。本指導(dǎo)原則列舉的試驗方法不能涵蓋的作用機(jī)制（同見 2.4節(jié)）。

2．光安全性評價的考慮因素

2.1．光化學(xué)性質(zhì)

評估潛在光反應(yīng)性的初步考慮因素是化合物在290~700nm 波長范圍內(nèi)能否吸收光子。當(dāng)化合物在290~700nm波長范圍內(nèi) （參考文獻(xiàn)3）的摩爾消光系數(shù) （MEC）不高于 1000L/mol/cm時，認(rèn)為該化合物不具有足夠的光反應(yīng)性來產(chǎn)生直接的光毒性（詳見注釋3）。

光激活的分子可通過能量傳遞機(jī)制產(chǎn)生活性氧（ROS)，包括超氧陰離子和單線態(tài)氧。即使光反應(yīng)會產(chǎn)生其他分子（如光加合物或細(xì)胞毒性光產(chǎn)物），通常也會生成 ROS。因此，紫外可見光照射后生成的 ROS 可作為潛在光毒性的標(biāo)志物。

光穩(wěn)定性試驗（參考文獻(xiàn) 4）也可提示潛在光反應(yīng)性，但不能檢測出的光反應(yīng)化合物，而且僅光降解信息也不能說明藥物具有光毒性，因此，僅根據(jù)光穩(wěn)定性試驗不能確定是否需要進(jìn)一步的光安全性評價。光化學(xué)性質(zhì)的評估應(yīng)按照高質(zhì)量科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，數(shù)據(jù)收集記錄隨時可用，或符合藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范/藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GLP/GMP）。

2.2．組織分布/藥代動力學(xué)

在一定的光暴露時間內(nèi)，組織內(nèi)光反應(yīng)化合物濃度是確定能否發(fā)生光毒性反應(yīng)的關(guān)鍵藥代動力學(xué)參數(shù)。組織內(nèi)光反應(yīng)化合物濃度取決于多種因素，如血漿濃度、 組織灌流情況、從血管到組織間隙、細(xì)胞隔室之間的分布，組織內(nèi)化合物的結(jié)合、滯留和蓄積情況。暴露的持續(xù)時間取決于由血漿和組
   織半衰期反應(yīng)出的清除率。總體上，這些參數(shù)界定了光反應(yīng)化合物在組織內(nèi)的平均滯留時間。

化合物在組織內(nèi)的結(jié)合、滯留或蓄積對光毒性反應(yīng)的發(fā)生不是關(guān)鍵因素。如果一個分子發(fā)生了充分的光反應(yīng)，則其在達(dá)到的血漿或組織間隙濃度時可能會導(dǎo)致光毒性反應(yīng)。然而，相比于半衰期和滯留時間較短或組織/血漿濃度比值較低的化合物，血漿半衰期較長、光暴露組織平均滯留時間較長或組織/血漿濃度比值較高的化合物更易導(dǎo)致光毒性反應(yīng)的發(fā)生。而且化合物濃度維持在光化學(xué)反應(yīng)濃度臨界值以上的時間越長，在人體發(fā)生光毒性的風(fēng)險就越大。

雖然低于組織濃度閾值時，光毒性反應(yīng)的風(fēng)險弱化有其科學(xué)合理性，但目前并沒有界定化合物的通用閾值?；诰唧w問題具體分析的原則，根據(jù)人體實際或預(yù)期的組織藥物濃度以及結(jié)合以上因素，判斷不需要進(jìn)一步的光安全性評價可能是合理的，如系統(tǒng)暴露水平很低的藥物，或血漿半衰期或組織滯留時間很短的藥物。

化合物與組織成分（如黑色素、角蛋白）的結(jié)合是導(dǎo)致組織滯留和/或蓄積的一種機(jī)制。盡管黑色素結(jié)合類藥物與黑色素結(jié)合可增加其組織濃度，但研究經(jīng)驗表明僅根據(jù)這種結(jié)合機(jī)制不會提示存在光安全性擔(dān)憂。

在動物單劑量給藥的組織分布試驗中，通常根據(jù)給藥后多個時間點藥物濃度情況即可充分評估組織/血漿濃度比、組織滯留時間和潛在滯留/蓄積性。 應(yīng)根據(jù)藥物的半衰期合理設(shè)置檢測時間點。

已經(jīng)證實，如果化合物被可見光激活且在體內(nèi)組織消除半衰期較長，則在用藥過程中如暴露于強(qiáng)光下會發(fā)生組織損傷。因此，對于那些可見光激活后具有體內(nèi)光毒性或基于作用機(jī)制認(rèn)為具有光毒性的化合物（如光動力治療藥物），需檢測體內(nèi)組織分布和組織特定的半衰期。對于僅吸收紫外光或組織消除半衰期短的藥物，即使已知具有光反應(yīng)性，不太可能存在體內(nèi)組織光毒性風(fēng)險。

2.3．代謝物

一般而言，因為通過代謝通常不會產(chǎn)生與母核明顯不同的生色基團(tuán)，所以無需對代謝物進(jìn)行單獨的光安全性評估。

2.4．藥理學(xué)特征

在很多情況下，藥物引起的光毒性源于其化學(xué)結(jié)構(gòu)，而非藥理作用。但某些藥理作用（如免疫抑制、血紅素穩(wěn)態(tài)異常）能增強(qiáng)光誘導(dǎo)反應(yīng)的敏感性，如皮膚刺激性或紫外線誘導(dǎo)皮膚腫瘤的形成。這些間接機(jī)制沒有體現(xiàn)在本指導(dǎo)原則列舉的試驗策略，部分間接機(jī)制可通過其他非臨床藥理毒理試驗進(jìn)行闡明和評價，其他間接機(jī)制相關(guān)的光毒性可能只有通過人用經(jīng)驗才能發(fā)現(xiàn)。

3．非臨床光安全性試驗

3.1．一般考慮

嚴(yán)謹(jǐn)?shù)剡x擇試驗條件，如同時考慮模型系統(tǒng)和相關(guān)的輻射光譜下的暴露量等，在非臨床光安全性試驗中很關(guān)鍵。理想的情況是，一個非臨床試驗應(yīng)同時具有較高的靈敏性和特異性（即低假陰性率和低假陽性率）。因為陰性試驗結(jié)果通常不需要進(jìn)行進(jìn)一步的光安全評價，所以非臨床光安全性試驗應(yīng)具有高靈敏性，出現(xiàn)假陰性頻率低（即高陰性預(yù)測值），以支持本指導(dǎo)原則中的評價策略?，F(xiàn)行的非臨床體外和體內(nèi)試驗方法主要關(guān)注潛在光毒性的檢測，臨床光毒性的相關(guān)性并不確定。

在體外和體內(nèi)試驗中，光照條件的選擇很重要。自然光是人類可能經(jīng)常接觸的有廣泛光譜范圍的光源。然而對于日光沒有明確的界定，其取決于許多因素，如緯度、海拔、季節(jié)、日照時長和天氣情況。此外，人體皮膚對自然光的敏感性取決于許多個體因素（如皮膚類型，解剖部位和膚色曬黑狀態(tài)等）。許多機(jī)構(gòu)定義了標(biāo)準(zhǔn)化的日光暴露條件，為評估日光模擬光源的適用性，應(yīng)考慮這些標(biāo)準(zhǔn)（如，參考文獻(xiàn)5），輻照度及照射劑量應(yīng)根據(jù)應(yīng)用光譜的 UVA部分進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。當(dāng)前的體外和體內(nèi)光毒性試驗，已成功應(yīng)用劑量范圍為 5-20J/cm2的 UVA，與夏季正午時分、在溫帶地區(qū)海邊長時間戶外活動時的光照相當(dāng)。在人體中由 UVB 引起的曬傷反應(yīng)通常會限制日光的總暴露量，但在非臨床光毒性試驗中，UVB的量不應(yīng)受到限制，但可降低（部分過濾），在不降低試驗靈敏度的情況下采用相關(guān)的 UVA劑量。UVB透入人體皮膚組織主要限于表皮，而 UVA 可到達(dá)毛細(xì)血管，所以對于全身用藥來說，UVA光化學(xué)活化的臨床相關(guān)性較 UVB更重要，而 UVB照射與應(yīng)用于光暴露組織的局部用藥相關(guān)。光毒性實驗推薦選用紫外輻照儀XEPU-1235L藥物體外細(xì)胞光毒性試驗箱

在研究方法中應(yīng)清晰描述合適光源（光譜分布、輻照及其照度）的選擇和監(jiān)測以及使用程序（如，參考文獻(xiàn) 6）。

3.2．采用化學(xué)分析的光化學(xué)反應(yīng)

如果藥物研發(fā)者選擇評價光反應(yīng)性，應(yīng)在合適條件下采用藥物制劑進(jìn)行方法學(xué)驗證以確證其靈敏性，其中一種方法是 ROS試驗（如..,參考文獻(xiàn) 7） ， 數(shù)據(jù)顯示此方法靈敏度高，可直接預(yù)測體內(nèi)的光毒性物質(zhì)，但特異性低、假陽性率高。

在合適條件下開展的該試驗的陰性結(jié)果提示光毒性的可能性很低，試驗濃度為 200μM即可檢測出，而陽性結(jié)果（任何濃度時）則預(yù)示著需進(jìn)行進(jìn)一步評估。

3.3．體外光毒性試驗

建立了許多評估化學(xué)物潛在光毒性的體外方法，部分還沒有進(jìn)行驗證，用于藥物檢測。部分試驗可用于檢測溶解在培養(yǎng)基中的化合物，根據(jù)溶解度情況，可適用于藥物活性成分或輔料。其他試驗可直接用于組織樣本表面，適用于檢測擬局部應(yīng)用的制劑。

應(yīng)用廣泛的體外試驗是 3T3 中性紅攝取光毒性試驗（3T3 NRU-PT），參見經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）指導(dǎo)原則（參考文獻(xiàn) 6），目前認(rèn)為是可溶性化合物合適的體外篩選方法。

雖然歐洲替代方法驗證中心（ECVAM） 的正式方法學(xué)驗證顯示該試驗靈敏度為 93％，特異性為 84％，但藥企內(nèi)部的經(jīng)驗數(shù)據(jù)顯示該方法的特異性很低。用于藥物的原始 OECD方案并未經(jīng)專門驗證，因此已有人提出對原始 OECD方案進(jìn)行一些修改， 以解決藥物檢測方法的低特異性（見注釋 4） ，以上的變更適用于藥物檢測。3T3 NRU-PT 的靈敏度較高，因此，如果一個化合物試驗結(jié)果為陰性，則人體光毒性的可能性會很低。但 3T3 NRU-PT試驗結(jié)果陽性不應(yīng)作為可能具有臨床光毒性風(fēng)險的標(biāo)志，僅提示需要進(jìn)一步的評估。

BALB/c 3T3 細(xì)胞系對 UVB敏感，初推薦的照射條件（參考文獻(xiàn)6）包括使用濾光片， 減弱320nm以下的光波長。

但可根據(jù)光源和所用的濾光片調(diào)整UVB與 UVA的比例，使該試驗?zāi)苡靡栽u估 UVB誘導(dǎo)的光毒性。 因為 UVB極少穿透表皮，所以 UVB 誘導(dǎo)的光毒性對于全身暴露的藥物幾乎不是問題，但與局部用藥的相關(guān)性較好，因此需對主要吸收UVB的局部用藥成分進(jìn)行體外評價，可考慮采用變更照射條件（見上文）的 3T3 NRU-PT試驗，或選擇更好耐受 UVB的體外皮膚模型。

建立的含有角質(zhì)層的人體皮膚模型可用于檢測各種類型的局部應(yīng)用材料，包括從純化的化學(xué)物到終的臨床用制劑。目前建立的人體皮膚模型可檢測有或無光照條件下的細(xì)胞活性，而且經(jīng)證實可檢出已知的人體急性皮膚光毒性物質(zhì)，但其靈敏度低于體內(nèi)人體皮膚試驗，如引起陽性反應(yīng)的低濃度高于體內(nèi)人體試驗，因此了解所選擇的任一試驗方法的敏感性很重要，如果適當(dāng)而且可行，可根據(jù)情況相應(yīng)調(diào)整試驗條件（如測試更高濃度的制劑，延長暴露時間等）。

至今沒有不考慮給藥途徑，專用于評價眼部光毒性的體外模型。即使根據(jù) 3T3 NRU-PT或人體皮膚模型試驗的陰性結(jié)果提示光毒性風(fēng)險較低，但對眼部光毒性的預(yù)測價值仍不可知。

3.4．體內(nèi)光安全性試驗和全身用藥

已有許多動物種屬，包括豚鼠、小鼠和大鼠，用于檢測化合物的全身用藥光毒性，雖尚未有標(biāo)準(zhǔn)的試驗設(shè)計，但好考慮以下因素。

動物種屬的選擇應(yīng)考慮光照敏感性（如發(fā)生小紅斑的劑量）、耐熱性及對照物性能。盡管與有色皮膚相比，無色皮膚用于檢測光毒性更敏感，但有色和無色動物模型都可以用。然而對于可與黑色素明顯結(jié)合的 APIs（見 2.2節(jié)），如果無法確保靶組織有適當(dāng)?shù)谋┞?，則應(yīng)考慮選擇有色皮膚動物模型。

如果開展體內(nèi)光毒性研究，好在試驗方案設(shè)計前獲得化合物的藥代動力學(xué)信息，以確保在與 Tmax相近的合適時間點照射，并有助于選擇與預(yù)期臨床暴露相關(guān)的合適研究周期。如果沒有化合物的藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)，應(yīng)將收集藥代信息作為體內(nèi)光毒性研究的內(nèi)容。

雖然光毒性是典型的急性反應(yīng)，但應(yīng)慎重考慮設(shè)計體內(nèi)試驗的研究期限?；衔镏貜?fù)給予后在相關(guān)光暴露組織的蓄積可能會增強(qiáng)光毒性反應(yīng)，同樣，化合物每次給予后重復(fù)光照射也會因累積損傷增強(qiáng)光毒性反應(yīng)。一般而言，采用臨床給藥途徑，選擇可行的或幾天的給藥期限較為合理，在給藥后 Tmax附近的時間點進(jìn)行每天的單次或重復(fù)照射。

全身給藥的非臨床體內(nèi)光毒性試驗劑量選擇應(yīng)支持人體試驗，并為人體風(fēng)險評估提供有價值的信息。試驗的高劑量應(yīng)符合 ICH M3（R2）第 1.5節(jié)中的推薦建議。如果高劑量組結(jié)果為陰性，則不需進(jìn)行較低劑量的試驗。但如果預(yù)期試驗結(jié)果為陽性， 則應(yīng)考慮比較Cmax增加劑量組以支持基于 NOAEL 的風(fēng)險評估。設(shè)置空白和非照射對照組有助于明確化合物相關(guān)的毒性，并且區(qū)分照射與非照射誘導(dǎo)的不良反應(yīng)。如果動物可達(dá)到的大系統(tǒng)暴露量低于臨床暴露量，則用陰性結(jié)果預(yù)測人體風(fēng)險的可靠性值得懷疑。

在低于引起紅斑的正常照射劑量，紅斑后水腫是化合物誘導(dǎo)光毒性敏感的早期癥狀。光毒性的反應(yīng)類型因化合物而異，應(yīng)評估任何確定的光毒性反應(yīng)的劑量和時間依賴性，如果可能，應(yīng)確定無毒性反應(yīng)劑量（NOAEL）。設(shè)置額外的檢測指標(biāo)（如，提示急性光刺激性的皮膚或淋巴結(jié)中早期炎癥標(biāo)記物），可進(jìn)一步為風(fēng)險鑒定提供支持性信息。

如果動物全身給予的藥物吸收大于400nm波長光，則應(yīng)采用詳細(xì)的組織病理學(xué)檢查評估視網(wǎng)膜光毒性。對于僅吸收小于 400nm波長光的化合物，因為角膜、晶狀體和玻璃體的穿透性限制了該波長不能到達(dá)成人的視網(wǎng)膜，則無需進(jìn)行視網(wǎng)膜評估。

對于未經(jīng)正式驗證的體內(nèi)光毒性試驗，好應(yīng)設(shè)置合適的化合物包括藥物作為對照進(jìn)行充分觀察。為充分驗證所選擇的方法，對照品應(yīng)包括人體光毒性化合物、代表不同化學(xué)類別和光毒性機(jī)制的化合物。在視網(wǎng)膜光毒性評估試驗，應(yīng)選擇吸收可見光范圍（如波長大于400nm）的對照品。如果體內(nèi)試驗已得到充分驗證，或被廣泛接受并在試驗室建立，則不需要同時設(shè)置陽性對照化合物。

對于全身給藥的化合物，人用后的光過敏反應(yīng)少見，而且尚未有評估系統(tǒng)用藥化合物的非臨床光過敏性試驗?zāi)Ｐ停圆唤ㄗh進(jìn)行光過敏性檢測。

3.5．體內(nèi)光安全性試驗和皮膚用藥

用于研究全身用藥的主要推薦建議同樣適用于皮膚用藥，包括動物種屬選擇、研究周期以及光照條件。對于皮膚局部用藥，一般應(yīng)用臨床制劑進(jìn)行試驗。應(yīng)盡可能采用臨床擬用條件，在給藥后的特定時間對暴露部位進(jìn)行光照，基于受試制劑的特殊性質(zhì)確定給藥和光照之間的時間間隔?；谙嚓P(guān)終點指標(biāo)（見 3.4 節(jié)）評估光毒性指征，并使用合適的對照品驗證試驗方法的靈敏性。皮膚給藥的光毒性研究一般無需評估藥物的系統(tǒng)暴露水平。

對于皮膚用藥，非臨床研究常結(jié)合急性光毒性（光刺激性）進(jìn)行接觸性光過敏性評估。但這些試驗方法并未經(jīng)正規(guī)驗證。因此，雖然認(rèn)為這些研究中觀察到的急性光刺激性與人體相關(guān)，但不能確定其對人光過敏性的預(yù)測價值。從監(jiān)管的角度，一般不推薦這種非臨床光過敏性試驗。

4．臨床光安全性評估

可選擇多種途徑收集人體試驗數(shù)據(jù)，如標(biāo)準(zhǔn)的臨床研究不良事件報告、專門的臨床光安全性試驗，其具體策略基于具體問題具體分析的原則。

5．評估策略

藥物研發(fā)者可選擇不同的光安全性評估策略。ICH M3（R2）建議，在門診患者入組前應(yīng)基于受試物的光化學(xué)性質(zhì)和藥理/化學(xué)類別，初步評估其潛在光毒性。推薦首先對紫外可見吸收光譜的特征進(jìn)行評估，以避免進(jìn)一步的光安全性評估。此外，需評估受試物在皮膚和眼的分布情況，以進(jìn)一步獲知人體風(fēng)險以及判斷是否需要進(jìn)行進(jìn)一步的試驗。之后，必要時，應(yīng)在受試物暴露于大樣本量患者的臨床試驗前（III期），進(jìn)行潛在光毒性試驗評價（包括體外、體內(nèi)或臨床試驗）。

圖 1列舉了可能的光毒性評價策略。該圖是基于本指導(dǎo)文件本節(jié)所述的策略制定。評估策略是靈活的，可根據(jù)具體情況進(jìn)行取舍。

圖 1. 全身和皮膚給藥的可能的光毒性評估策略

* 否則數(shù)據(jù)不支持低的潛在光毒性，或未得到數(shù)據(jù)（未開展試驗/評價）。

# 一項良好進(jìn)行的體內(nèi)光毒性試驗的陰性結(jié)果的參考價值大于體外試驗的陽性結(jié)果。一項可靠的臨床光毒性評估表明無安全性擔(dān)憂的參考價值大于任一非臨床試驗陽性結(jié)果。根據(jù)具體問題具體分析的原則，組織分布數(shù)據(jù)也可否定體外光毒性試驗的陽性結(jié)果。在美國，對于皮膚用藥，需對擬上市制劑進(jìn)行專門的光毒性臨床試驗用于支持其上市申請。

$ 臨床評價包括標(biāo)準(zhǔn)的臨床研究不良事件報告、專門的臨床光安全性試驗。（與第 4 節(jié)保持一致）

§ 皮膚產(chǎn)品的光毒性評估無需考慮組織分布。

5.1．全身給藥藥物的技術(shù)要求

5.1.1．潛在光毒性評估

如果受試物的 MEC 不高于 1000L/mol/cm（波長在290~700nm)，不建議進(jìn)行光安全性試驗，而且預(yù)測不會對人體有直接光毒性。但應(yīng)關(guān)注經(jīng)間接機(jī)制發(fā)生的光毒性（如偽卟啉癥或卟啉癥），盡管少見仍會發(fā)生。對于 MEC 不低于1000L/mol/cm 的化合物，如果藥物研發(fā)者選擇開展一種光反應(yīng)性試驗，若得到陰性結(jié)果，可支持不需進(jìn)一步光安全性評估的決策（見 3.2節(jié)），否則需開展非臨床和/或臨床光安全性評估。應(yīng)對已有相關(guān)化學(xué)類別的化合物光毒性數(shù)據(jù)進(jìn)行評價，以提示可采用的試驗方法。

5.1.2．光毒性試驗評估

根據(jù) 3R 原則，為減少動物的使用，通常在開展動物試驗前考慮一種經(jīng)驗證的體外試驗方法（如，見指令2010/63/EU）。如果藥物研發(fā)者選擇一種體外方法，則 3T3 NRU-PT 是目前應(yīng)用廣泛的試驗，而且在很多情況下用于光毒性的初步檢測。3T3 NRU-PT 的高靈敏性使其陰性結(jié)果具有較好的預(yù)測性，陰性結(jié)果通?？勺鳛闊o光毒性的充分證據(jù)，這種情況下，不建議進(jìn)行進(jìn)一步的光安全性試驗，而且可預(yù)測對人體不存在直接的光毒性。

在某些情況下（如溶解性差的化合物），可能不適宜采用體外試驗初步評估光毒性，此時應(yīng)考慮進(jìn)行動物體內(nèi)或人體試驗評估?；蚋鶕?jù)具體問題具體分析的原則，如果有藥物的分布數(shù)據(jù)，則可支持無需進(jìn)行進(jìn)一步光安全性評估的決策（見 2.2節(jié)）。

如果體外光毒性試驗結(jié)果陽性，則需要開展動物體內(nèi)光毒性試驗，以評估體外試驗確定的潛在光毒性與體內(nèi)試驗結(jié)果的相關(guān)性?；蚧诰唧w問題具體分析的原則，如果藥物的分布數(shù)據(jù)提示其體內(nèi)光毒性風(fēng)險很低，則無需進(jìn)行進(jìn)一步光安全性評估（見 2.2 節(jié)）。另外一種選擇是，可在臨床試驗過程中評估光安全性風(fēng)險，或臨床試驗期間采取避光措施。一項合適的動物體內(nèi)或人體光毒性試驗陰性結(jié)果的參考價值大于陽性結(jié)果的體外試驗，且該情況下不建議進(jìn)行進(jìn)一步的試驗，并可預(yù)測對人體不存在直接的光毒性。

某些情況下，體內(nèi)動物試驗結(jié)果陽性提示的風(fēng)險程度，可在基于 NOEAL 的風(fēng)險評估中有所減弱，并通?？紤]與Cmax的比較情況，否則需進(jìn)行臨床評估。在所用情況下，如果一項可靠的臨床光毒性評估充分提示無相關(guān)擔(dān)憂，則其參考價值大于非臨床陽性結(jié)果的提示價值。

后續(xù)開展的光化學(xué)反應(yīng)試驗（如 ROS 試驗）的陰性結(jié)果不能否定體外光毒性試驗的陽性結(jié)果。

如已開展動物或臨床光毒性試驗，則無需再開展光化學(xué)反應(yīng)或體外光毒性試驗。

5.2．皮膚給藥藥物的技術(shù)要求

5.2.1．潛在光毒性評估

如果活性成分和輔料的 MEC 不高于 1000L/mol/cm（波長在 290~700nm)，不建議進(jìn)行進(jìn)一步的光安全性試驗，而且預(yù)測不會對人體有直接的光毒性。對于 MEC 不低于1000L/mol/cm 的化合物，光反應(yīng)試驗（如 ROS 試驗）結(jié)果陰性可支持無需進(jìn)行進(jìn)一步光安全性評價的決策（注釋 5除外）。如需進(jìn)一步評估，應(yīng)對已有相關(guān)化學(xué)類別的化合物光毒性數(shù)據(jù)進(jìn)行評估，以提示可采用的試驗方法。

組織分布不是皮膚給藥光毒性的考慮因素，皮膚給藥直接用于皮膚，因此除非用于通常不暴露于光的部位，一般認(rèn)為藥物存在于光暴露組織。

5.2.2．光毒性及光過敏性試驗評估

只要具有合適的檢測條件（如試驗濃度不受低溶解度的限制，可提供相關(guān) UVB劑量），3T3 NRU-PT可單獨用于評估 APIs 及任何新輔料的潛在光毒性。如在體外未鑒定出任何光毒性成分，則認(rèn)為該臨床制劑的潛在光毒性很低。

不能僅用 3T3 NRU-PT評價影響潛在光毒性反應(yīng)的臨床制劑的某些性質(zhì)（如皮膚滲透，胞內(nèi)攝?。虼巳杂斜匾_認(rèn)采用臨床制劑得到的整體陰性結(jié)果，和/或臨床試驗期間進(jìn)行監(jiān)測。

建立的人體皮膚模型可用于評估臨床制劑的潛在光毒性。在合適的試驗條件下（見 3.3 節(jié)），如果建立的人體皮膚模型試驗結(jié)果陰性，則認(rèn)為制劑的直接潛在光毒性很低，此時通常不建議進(jìn)行進(jìn)一步的光毒性試驗（注釋 5 除外）。

如果無法進(jìn)行合適的體外試驗，則可開展臨床制劑的體內(nèi)光毒性試驗。如果開展的體內(nèi)動物光毒性研究結(jié)果陰性，可充分說明該制劑無直接光毒性，則不建議進(jìn)一步的光毒性試驗（注釋 5除外）。 或者可臨床試驗中評估其潛在光毒性。

對于 MEC 高于 1000L/mol/cm(290~700nm)的 APIs 或新輔料的皮膚用產(chǎn)品，除光毒性試驗外通常需進(jìn)行光過敏性評估。由于非臨床光過敏性試驗的預(yù)測性未知，通常使用擬上市制劑進(jìn)行臨床評估，并在 III期臨床試驗期間進(jìn)行。

臨床皮膚貼劑的光安全性評價可參照上述臨床皮膚制劑的技術(shù)要求，對于透皮貼劑，皮膚及全身用藥的技術(shù)要求均可適用。此外，在整體風(fēng)險評估時應(yīng)考慮臨床用法（如推薦使用的皮膚部位、用藥期限）和貼劑基質(zhì)的性質(zhì)（如不透過 UV和可見光）。

6．注釋

注釋 1． 對于在 相關(guān) 波長 有吸 收 、 MEC 高于1000L/mol/cm 的經(jīng)眼給藥（如滴眼、眼內(nèi)注射）的化合物，應(yīng)根據(jù)光毒性評估的一般原則進(jìn)行潛在光毒性評價。整體評估時應(yīng)考慮藥物在眼中的生物分布及眼的光學(xué)性質(zhì)，以及有關(guān)該化合物或相關(guān)化學(xué)類別化合物的任何可用信息。

因為只有波長大于 400nm的光可到達(dá)成人的眼后部，因此對于僅在波長低于 400nm有吸收、 并進(jìn)行晶狀體后眼內(nèi)注射（例玻璃體內(nèi)）的化合物，其視網(wǎng)膜光毒性的擔(dān)憂較低，但 10 歲以下兒童的晶狀體不能完全防護(hù)波長低于 400nm 的光。

注釋 2．不推薦光遺傳毒性作為標(biāo)準(zhǔn)光安全性試驗程序的一部分。過去，一些區(qū)域性指導(dǎo)原則（如 CPMP/SWP/398/01)推薦開展光遺傳性試驗，優(yōu)先采用體外哺乳動物細(xì)胞光染色體畸變試驗（染色體畸變或微核試驗）。但自 CPMP/SWP指導(dǎo)原則頒布以來，以上模型的使用經(jīng)驗顯示其過于敏感，有報道稱出現(xiàn)光染色體畸變假陽性（參考文獻(xiàn) 8），而且光遺傳毒性數(shù)據(jù)相關(guān)意義的闡釋與臨床增強(qiáng) UV介導(dǎo)皮膚癌的相關(guān)性仍不清楚。

注釋 3．確定 MEC的標(biāo)準(zhǔn)化條件至關(guān)重要。根據(jù)分析要求（如溶解能力、 UV-可見光透光度）和生理相關(guān)性（如 pH7.4緩沖液）選擇合適的溶劑，推薦甲醇作為溶劑，并用于支持 1000L/mol/cm 的 MEC 閾值（參考文獻(xiàn) 3）。測量紫外-可見光譜時，應(yīng)考慮潛在的局限性（如，由于高濃度或低溶解度，包括緩慢沉淀造成的偽影）。如果分子的生色基團(tuán)對pH敏感（如酚結(jié)構(gòu)，芳香胺，羧酸等），在 pH7.4 緩沖液條件下獲得的光譜可增加有關(guān)吸收光譜形狀和MECs差異的有效信息。如果在甲醇和 pH 調(diào)節(jié)條件下測定存在明顯差異，則1000L/mol/cm的MEC閾值不能用于排除進(jìn)一步的光安全性評估。

注釋 4．如 OECD TG432 所述，制藥公司的一項調(diào)查顯示3T3 NRU-PT試驗中產(chǎn)生了高比例的陽性結(jié)果（約50％），其中大部分與動物或人體光毒性反應(yīng)無關(guān)（參考文獻(xiàn) 9）。藥物回顧性數(shù)據(jù)顯示，大測試濃度從 1000μg/mL 降低至100μg/mL 是合理的（參考文獻(xiàn) 10）。達(dá)到該閾值未見任何明顯細(xì)胞毒性（照射下）的化合物，認(rèn)為無相關(guān)光毒性。此外，根據(jù) OECD TG 432，歸為“可能具有光毒性”（即光刺激因子（PIF）值介于 2~5或平均光效應(yīng) （MPE） 值介于 0.10~0.15）一類的全身用藥的毒理學(xué)相關(guān)性是值得懷疑的，該類化合物通常不需進(jìn)行進(jìn)一步的光安全性評價。對于 PIF 值介于 2~5且在沒有照射的情況下不能確定 IC50的化合物，重要的是檢查采用 MPE 計算該化合物不被歸類為陽性，即，MPE 小于0.15。

全身用藥藥物僅在體外濃度高于人體光暴露組織可到達(dá)濃度的許多倍時 3T3 NRU-PT結(jié)果陽性，基于具體問題具體分析的原則，并與監(jiān)管部門協(xié)商，可以認(rèn)為人體光毒性的風(fēng)險較低，不需進(jìn)行進(jìn)一步的體內(nèi)試驗。

注釋 5．在美國，對于皮膚用藥，需對擬上市制劑（APIs與賦形劑）進(jìn)行專門的光毒性（光刺激性）臨床試驗用于支持其上市申請。

7．術(shù)語

3T3 NRU-PT：體外 3T3中性紅攝取光毒性試驗。

評估：在本文件中，評估是對可用信息的評價，并不總意味開展額外的試驗。

生色基團(tuán)：吸收可見光或紫外光的分子子結(jié)構(gòu)。

皮膚用藥：用于皮膚局部的藥物。

直接光毒性：藥物或輔料吸收光誘導(dǎo)的光毒性。

間接光毒性：由藥物或輔料引起的細(xì)胞、生化或生理變化導(dǎo)致的光毒性，與藥物或輔料的光化學(xué)反應(yīng)性無關(guān)（如血紅素穩(wěn)態(tài)異常）。

輻照度：某一指定表面上單位面積所接受的紫外或可見光強(qiáng)度，以 W/m2 or mW/cm2為單位。

照射：受試物或?qū)ο蟊┞队谧贤饩€或可見光照射的過程。

MEC：摩爾消光系數(shù)（也稱摩爾吸光系數(shù)）反映分子對特定波長光的吸收能力（通常表示為L/mol/cm），并受溶劑等因素的影響。

MPE：平均光效應(yīng)，是 3T3 NRU-PT試驗的結(jié)果，MPE基于比較完整的濃度-反應(yīng)曲線得到（見 OECD TG 432）。

NOAEL：未見不良反應(yīng)劑量。

OECD TG：經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織，試驗指導(dǎo)原則。

門診病人研究：受試人群不局限于臨床研究地點的臨床研究。

光產(chǎn)物：光化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的新化合物或結(jié)構(gòu)。

光反應(yīng)性：化合物吸收光后與其他分子反應(yīng)的性質(zhì)。

PIF：光刺激因子，是 3T3 NRU-PT試驗的結(jié)果，通過比較有無光照下的 IC50值得到。

ROS：活性氧，包括超氧陰離子和單線態(tài)氧。

全身用藥：給藥后會產(chǎn)生系統(tǒng)暴露的藥物。

UVA：紫外線 A（波長介于 320~400nm）。

UVB：紫外線 B（波長介于 280~320nm，日光中波長介于 290~320nm的部分）。