iCLIP交聯(lián)用哪個波段？多高能量輻照？

iCLIP交聯(lián)用哪個波段？多高能量輻照？

分子生物學(xué)的iCLIP實(shí)驗(yàn)，不知道用哪個波段和多少能量輻照，根據(jù)使用過紫外交聯(lián)儀的老師反饋，iCLIP實(shí)驗(yàn)需要用254nm的紫外交聯(lián)儀對細(xì)胞進(jìn)行紫外輻照，UV-C輻照能量為150 mJ/cm2，照射一次。

紫外交聯(lián)儀在分子生物學(xué)的應(yīng)用：

在紫外線照射下，在分子水平上，核酸鏈中相鄰的嘧啶可以發(fā)生二聚化，這主要發(fā)生在胸腺嘧啶堿基4-6之間。近 100 年來，研究人員一直利用紫外線的這一特性作為研究基因突變的工具。

紫外交聯(lián)儀應(yīng)用包括：

1.光穩(wěn)定性驗(yàn)證

2.突變生物學(xué)（生存分析、紫外線誘導(dǎo)突變、應(yīng)激分析）

3.聚合物固化（例如甲基丙烯酸酯樹脂、水凝膠）

4.膜交聯(lián)（Northern/Southern 印跡，EMSA）

5.微生物滅活（如細(xì)菌、真菌、病毒）

6.雙分子交聯(lián)（PAR-CLIP-seq、pBpa、CLIP-seq、iCLIP-seq、sulfo-SDA、補(bǔ)骨脂素）

這些應(yīng)用依賴于可重復(fù)的、高強(qiáng)度的紫外線劑量。LUYOR的紫外交聯(lián)儀型號是UCL-3200/3500。UCL-3200/3500交聯(lián)儀有一個內(nèi)置高精度紫外福照度計，紫外福照度計可追溯標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保無論時間和空間如何都能獲得一致的劑量。

紫外交聯(lián)儀UCL-3200/UCL-3500的操作

紫外交聯(lián)儀UCL-3200/UCL-3500能夠按照時間或能量 J/cm 2為單位進(jìn)行設(shè)置。因紫外線燈管使用壽命、環(huán)境溫度、供電電壓等因素會造成紫外線強(qiáng)度會發(fā)生變化，建議用戶輻照使用能量設(shè)置，盡量不用時間設(shè)置。

如果文獻(xiàn)里使用的是能量單位，用戶可以轉(zhuǎn)換為 J/cm 2，這是該儀器上用于輸入的測量單位。在下面表格里面提供了各種能量單位如何轉(zhuǎn)換。

如果文獻(xiàn)里面是強(qiáng)度單位，通常以 μW/cm 2為單位，則該值將伴隨曝光時間。用戶必須將輻照能量值轉(zhuǎn)換為 mW/cm 2，在下面表格里面提供了各種強(qiáng)度單位如何轉(zhuǎn)換。此外，用戶必須將曝光時間轉(zhuǎn)換為秒（例如 10 分鐘 = 600 秒）。

例如：

研究人員將某種流感病毒暴露于 2000 uW/cm2 10 分鐘。將報告的紫外線劑量轉(zhuǎn)換為 J/cm 2。

轉(zhuǎn)換方法 ：

輻照強(qiáng)度 (mW/cm 2 )* 時間(秒) = 輻照劑量 (mJ/cm 2 )

2 mW/cm 2 * 600 秒 = 1200 (mJ/cm 2 )=1.2 (J/cm 2 )交聯(lián)輻照如何放置輻照樣品？

建議用戶將樣品放置在紫外交聯(lián)儀輻照腔的照明中心位置。放置在中心的樣品能確保輻照到到設(shè)置的劑量。由于邊緣效應(yīng)，放置在后面和前面位置的樣本接收的劑量將少于設(shè)置的劑量。